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基于免疫原理的POCT技术及其原理
发布时间:2014-04-26   点击:

 

   基于免疫反应原理的POCT体外诊断仪器体外诊断试剂测试装置依据流动相的流动方式可粗略地被分为两大类:一类为免疫渗滤技术,利用多孔基质形成反应池,在非均相免疫测试(渗滤)中作为固相;另一类为免疫层析技术,沿着多孔材料(横流)进行分离。用于POCT检测装置抗体的标记物常见的有3类:胶体金标记、彩色乳胶标记、酶标记,其中尤以胶体金免疫标记技术为常用。

    (1) 免疫斑点渗滤技术:有特异性待测物抗原(抗体)共价结合在多孔介质表面,通常使用醋酸纤维膜放置在吸水材料上,当样品滴加到膜上后,样品中的待测物质结合到膜上的抗原(抗体)上。洗去膜上的未结合成分后,然后加入被标记的二抗并同已经结合有一抗的分析物一起形成夹心。标记物直接可视(比如彩色乳胶或胶体金颗粒)或通过加入其他的试剂(例如酶底物)来放大可见变化。利用反射仪器阅读产物的颜色变化以达到定量分析的目的。另外,还可以将纯分析物包被于基质的其他区域来建立内控区,其阳性结果表明试剂(还有装置、二抗)的储存和使用没有任何问题。  

    (2) 免疫层析技术:将金标抗体吸附于下端的玻璃纤维纸上,浸入样品后,此金标单抗即被溶解,开始通过毛细作用随样品流动,若样品中含有相应抗原时,即形成 Ab-Ag-Ab-金复合物,当上行至中段醋酸纤维薄膜,即与包被在膜上的抗原(抗体)结合并被固定呈现红色线条(阳性结果)。免疫层析技术与前者的区别在于液体的移动不是通过直向的穿流,而是基于层析作用的横流。

          

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    在一塑料片条上依次粘贴如下组份:(1)玻璃纤维膜;(2)聚酯膜,膜上固定着干燥的金标/乳胶抗体;(3)硝酸纤维素膜,膜上包被着线条状的抗体;(4)吸水纸。以上各组份首尾互相衔接,因此在(1)处滴加液体标本,液流即向(4)处移动。当液体到达(2)处时,金标抗体被溶解,同时与标本中的抗原反应而形成复合物。液流继续前移至(3),金标记的复合物再与膜上的抗体结合而呈现红色的线条,多余的金标抗体继续向前流动到质控区域,该区域固定有抗抗体,直接捕捉未结合的二抗。

    (3) 胶体金免疫标记技术:氯金酸(HAuCl 4 )在还原剂作用下,可聚合成一定大小的金颗粒,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。用胶体金标记单克隆抗体与抗原结合,可出现颜色变化,从而显示待测抗原的存在。